Q:保真性
A:具有3’→5’外切酶活性,保真性能顯著優(yōu)于普通 Taq 聚合酶,具有高保真擴增特性。
Q:延伸速率
A:具有較高的延伸速率,在推薦的條件下大于每分鐘2kb
Q:用途
A:用于高保真、快速擴增目標DNA,環(huán)拉法引入點突變,補平DNA粘性末端等。
Q:活性定義
A:嗜熱菌DNA Polymerase的活性單位定義為:在推薦的緩沖反應(yīng)體系中,以大馬哈魚精DNA為模板,68℃ 30分鐘內(nèi)合成10nmol核酸所需要的酶量為1活性單位。
Q:質(zhì)量控制
A:經(jīng)酶切實驗檢測無外源核酸酶污染,PCR方法未檢測到宿主DNA殘留,-20℃存放一年,無明顯活性喪失。
Q:貯存溶液
A:50mM Tris-HCL(PH 7.6),50mM KCL,1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(v/v)glycerol。
Q:PCR體系(可參考)
A:
| HS-KOD | 0.5-1ul |
| 2*KOD buffer | 10ul |
| dNTP(10mM each) | 0.5ul |
| Primers(10uM) | 1ul(各0.5ul) |
| 無菌H2O | Up to 20ul |
Q:PCR程序(可參考-根據(jù)實際反應(yīng)條件摸索優(yōu)化)
A:
| 98℃ 5min | 1Cycle |
| 98℃ 20s |
普通質(zhì)粒擴增(28 Cycles)
質(zhì)粒點突變(20 Cycles)
cDNA模板擴增(28-35 Cycles)
末端補平(5 Cycles)
|
| 52℃(Tm-5℃) 20s | |
| 68℃ 1.5kb/min | |
| 68℃ 3min | 1 Cycle |
Q:引物長度
A:引物的適當長度為20-35bp;過長或者過短,需要優(yōu)化退火溫度
Q:GC含量高
A:如GC含量高,請使用GC buffer,對保真性沒有影響
Q:擴增基因組或GC含量較高時,什么溫度變性
A:建議每個循環(huán)98℃變性
Q:熱啟動
A:Hotstart-KOD為熱啟動修飾酶,需要高溫激活才有活性(98℃ 5min)
本產(chǎn)品僅供科學研究使用,不得用于人體 / 動物醫(yī)療、診斷及臨床治療
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