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蛋白表達(dá)和純化實驗

表達(dá)體系介紹
表達(dá)體系 宿主細(xì)胞 表達(dá)量 特點
原核 E.coli 0.1-100g ·   載體構(gòu)建簡單、表達(dá)量高 ·   容易形成包涵體、無翻譯后修飾
酵母 Pichia Saccharomyces cerevisiae 0.1-100g ·   表達(dá)量較高、蛋白可以較好折疊 ·   缺少多種翻譯后修飾
昆蟲 Insect cell-Baculovirus 0.1-10g ·   表達(dá)量相對較低、有反應(yīng)后修飾 ·   表達(dá)體系相對復(fù)雜
哺乳 293 CHO 0.1-10g ·   表達(dá)量低 ·   翻譯后修飾完全、蛋白具有天然活性

流程和周期
流程 內(nèi)容 詳情 周期（工作日）
1 分子克隆，構(gòu)建表達(dá)載體   ·   由客戶提供基因或者代為克隆基因 ·   把基因克隆到相應(yīng)的表達(dá)載體上 ·   對基因表達(dá)載體測序驗證 5-10
2 小規(guī)模表達(dá)測試   ·   驗證表達(dá)載體可以表達(dá)正確的蛋白 ·   摸索表達(dá)條件 5-10
3 大規(guī)模表達(dá)、純化   ·   1-50升表達(dá)體系 ·   純化蛋白 5-10
4 純化后蛋白檢測   SDS-PAGE、Western Blotting、LC-MS、HPLC、Activity Assay 1-5

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