Q:逆轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)原理

A:莫洛尼氏鼠白血病毒逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV RT）能以單鏈RNA或DNA為模板，在引物的引發(fā)下合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。

Q:來源

A:重組蛋白質(zhì)（E.coli），通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)的缺失突變型Rnase H-的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶，Rnase H活性缺失，延伸能力強(qiáng)，可用于較長的cDNA合成以及高比例的全長cDNA文庫的構(gòu)建等

Q:活力單位定義

A:以Poly（A）為模板，Oligo（dT）為引物，，在37℃條件下，10min內(nèi)催化摻入1nmol dTTP所需酶量定義為1個(gè)活性單位（U）

Q:應(yīng)用

A:用于1st-Strand cDNA的合成，RT-PCT反應(yīng)以及Real Time RT-PCR反應(yīng)等。

Q:模板RNA/引物混合液的配置

A:

Q:混合液配置后處理

A:65℃保溫5min后迅速在冰上冷卻2min

Q:反應(yīng)體系

A:

Q:反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間

A:42℃孵育1小時(shí)；
   以Random Primers作為反轉(zhuǎn)錄引物時(shí)應(yīng)先于25℃，反應(yīng)10min，然后再于42℃條件孵育1小時(shí)。

Q:終止反應(yīng)

A:70℃加熱15min終止反應(yīng)。

Q:終產(chǎn)物

A:cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA的合成或PCR擴(kuò)增。

Q:Rnase H—缺失與普通MMLV的區(qū)別

A:H型缺失的可用于較長cDNA合成及高比例的全長cDNA文庫構(gòu)建

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)使用，不用于臨床診斷或治療。