Q:這種直接PCR試劑盒,擴(kuò)增產(chǎn)物可以做哪些實(shí)驗(yàn)
A:PCR的產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和EB染色進(jìn)行分析,進(jìn)行下游的常規(guī)操作,例如限制性酶切、DNA測(cè)序、dHPLC分析等
Q:可以應(yīng)用于哪些領(lǐng)域
A:1、人類(lèi)、其他哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)基因分析;
2、可用于常規(guī)檢測(cè):限制性酶切、瓊脂糖凝膠電泳/EB染色、熒光毛細(xì)管電泳、DNA測(cè)序或dHPLC分析
Q:適用樣品
A:新鮮或凍存的組織、細(xì)胞、病毒樣顆粒、病毒載體等科研樣品(保存良好的石蠟包埋樣品)
Q:樣品準(zhǔn)備
A:1、組織或細(xì)胞一般不需要處理,取103-105左右的樣品直接PCR;
2、石蠟包埋的樣品,建議加入5-10倍體積的預(yù)處理液中,55℃孵育過(guò)夜后,煮沸2-5min,取1-2.5ul樣品進(jìn)行PCR(2-5%總反應(yīng)體積);剩余樣品保存在-20℃
Q:反應(yīng)體系
A:以20ul體系示例(20-50ul/reaction),在微量離心管中加入以下各種成分
| 樣品裂解液 | 1-2ul |
| 聚合酶 | 0.5-1ul |
| 5*PCR Buffer | 4ul |
| dNTP(10mM) | 0.4ul |
| Primers | 1-2ul(0.25-1uM終濃度) |
| ddH2O | UP to 20ul |
Q:PCR反應(yīng)參數(shù)設(shè)置
A:依據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物而定,以2kb的擴(kuò)增產(chǎn)物為例:94℃ 4 min,35 cycles(94℃ 30 sec,55℃ 30 sec,72℃ 1 min),72℃ 5 min,4℃保溫。
Q:我的片段大?。?kb
A:擴(kuò)增1kb以下片段,30 sec延伸即可;也可采用兩步擴(kuò)增法(設(shè)計(jì)引物長(zhǎng)度22-25bp,68℃退火延伸)
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用,不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療
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