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7Sea-Tissue Direct PCR 試劑盒

Q:這種直接PCR試劑盒,擴(kuò)增產(chǎn)物可以做哪些實(shí)驗(yàn)

A:PCR的產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和EB染色進(jìn)行分析,進(jìn)行下游的常規(guī)操作,例如限制性酶切、DNA測(cè)序、dHPLC分析等



Q:可以應(yīng)用于哪些領(lǐng)域

A:1、人類(lèi)、其他哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)基因分析;

   2、可用于常規(guī)檢測(cè):限制性酶切、瓊脂糖凝膠電泳/EB染色、熒光毛細(xì)管電泳、DNA測(cè)序或dHPLC分析




Q:適用樣品

A:新鮮或凍存的組織、細(xì)胞、病毒樣顆粒、病毒載體等科研樣品(保存良好的石蠟包埋樣品)




Q:樣品準(zhǔn)備

A:1、組織或細(xì)胞一般不需要處理,取103-105左右的樣品直接PCR;

   2、石蠟包埋的樣品,建議加入5-10倍體積的預(yù)處理液中,55℃孵育過(guò)夜后,煮沸2-5min,取1-2.5ul樣品進(jìn)行PCR(2-5%總反應(yīng)體積);剩余樣品保存在-20℃




Q:反應(yīng)體系

A:以20ul體系示例(20-50ul/reaction),在微量離心管中加入以下各種成分

樣品裂解液 1-2ul
聚合酶 0.5-1ul
5*PCR Buffer 4ul
dNTP(10mM) 0.4ul
Primers 1-2ul(0.25-1uM終濃度)
ddH2O UP to 20ul

Q:PCR反應(yīng)參數(shù)設(shè)置

A:依據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物而定,以2kb的擴(kuò)增產(chǎn)物為例:94℃ 4 min,35 cycles(94℃ 30 sec,55℃ 30 sec,72℃ 1 min),72℃ 5 min,4℃保溫。


Q:我的片段大?。?kb

A:擴(kuò)增1kb以下片段,30 sec延伸即可;也可采用兩步擴(kuò)增法(設(shè)計(jì)引物長(zhǎng)度22-25bp,68℃退火延伸)


本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用,不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療


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