Q:保真性
A:具有3’→5’外切酶活性,保真性能顯著優(yōu)于普通 Taq 聚合酶,具有高保真擴(kuò)增特性。
Q:延伸速率
A:具有較高的延伸速率,在推薦的條件下大于每分鐘2kb
Q:用途
A:用于高保真、快速擴(kuò)增目標(biāo)DNA,環(huán)拉法引入點(diǎn)突變,補(bǔ)平DNA粘性末端等。
Q:活性定義
A:嗜熱菌DNA Polymerase的活性單位定義為:在推薦的緩沖反應(yīng)體系中,以大馬哈魚(yú)精DNA為模板,68℃ 30分鐘內(nèi)合成10nmol核酸所需要的酶量為1活性單位。
Q:質(zhì)量控制
A:經(jīng)酶切實(shí)驗(yàn)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶污染,PCR方法未檢測(cè)到宿主DNA殘留,-20℃存放一年,無(wú)明顯活性喪失。
Q:貯存溶液
A:50mM Tris-HCL(PH 7.6),50mM KCL,1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(v/v)glycerol。
Q:PCR體系(可參考)
A:
| HS-KOD | 0.5-1ul |
| 2*KOD buffer | 10ul |
| dNTP(10mM each) | 0.5ul |
| Primers(10uM) | 1ul(各0.5ul) |
| 無(wú)菌H2O | Up to 20ul |
Q:PCR程序(可參考-根據(jù)實(shí)際反應(yīng)條件摸索優(yōu)化)
A:
| 98℃ 5min | 1Cycle |
| 98℃ 20s |
普通質(zhì)粒擴(kuò)增(28 Cycles)
質(zhì)粒點(diǎn)突變(20 Cycles)
cDNA模板擴(kuò)增(28-35 Cycles)
末端補(bǔ)平(5 Cycles)
|
| 52℃(Tm-5℃) 20s | |
| 68℃ 1.5kb/min | |
| 68℃ 3min | 1 Cycle |
Q:引物長(zhǎng)度
A:引物的適當(dāng)長(zhǎng)度為20-35bp;過(guò)長(zhǎng)或者過(guò)短,需要優(yōu)化退火溫度
Q:GC含量高
A:如GC含量高,請(qǐng)使用GC buffer,對(duì)保真性沒(méi)有影響
Q:擴(kuò)增基因組或GC含量較高時(shí),什么溫度變性
A:建議每個(gè)循環(huán)98℃變性
Q:熱啟動(dòng)
A:Hotstart-KOD為熱啟動(dòng)修飾酶,需要高溫激活才有活性(98℃ 5min)
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用,不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療
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