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HOT START KOD

Q:保真性

A:具有3’→5’外切酶活性,保真性能顯著優(yōu)于普通 Taq 聚合酶,具有高保真擴(kuò)增特性。


Q:延伸速率

A:具有較高的延伸速率,在推薦的條件下大于每分鐘2kb



Q:用途

A:用于高保真、快速擴(kuò)增目標(biāo)DNA,環(huán)拉法引入點(diǎn)突變,補(bǔ)平DNA粘性末端等。


Q:活性定義

A:嗜熱菌DNA Polymerase的活性單位定義為:在推薦的緩沖反應(yīng)體系中,以大馬哈魚(yú)精DNA為模板,68℃ 30分鐘內(nèi)合成10nmol核酸所需要的酶量為1活性單位。




Q:質(zhì)量控制

A:經(jīng)酶切實(shí)驗(yàn)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶污染,PCR方法未檢測(cè)到宿主DNA殘留,-20℃存放一年,無(wú)明顯活性喪失。


Q:貯存溶液

A:50mM Tris-HCL(PH 7.6),50mM KCL,1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(v/v)glycerol。




Q:PCR體系(可參考)

A:

HS-KOD 0.5-1ul
2*KOD buffer 10ul
dNTP(10mM each) 0.5ul
Primers(10uM) 1ul(各0.5ul)
無(wú)菌H2O Up to 20ul

Q:PCR程序(可參考-根據(jù)實(shí)際反應(yīng)條件摸索優(yōu)化)

A:

98℃  5min 1Cycle
98℃  20s
普通質(zhì)粒擴(kuò)增(28 Cycles)
質(zhì)粒點(diǎn)突變(20 Cycles)
cDNA模板擴(kuò)增(28-35 Cycles)
末端補(bǔ)平(5 Cycles)
52℃(Tm-5℃)  20s
68℃  1.5kb/min
68℃  3min 1 Cycle



Q:引物長(zhǎng)度

A:引物的適當(dāng)長(zhǎng)度為20-35bp;過(guò)長(zhǎng)或者過(guò)短,需要優(yōu)化退火溫度


Q:GC含量高

A:如GC含量高,請(qǐng)使用GC buffer,對(duì)保真性沒(méi)有影響




Q:擴(kuò)增基因組或GC含量較高時(shí),什么溫度變性

A:建議每個(gè)循環(huán)98℃變性




Q:熱啟動(dòng)

A:Hotstart-KOD為熱啟動(dòng)修飾酶,需要高溫激活才有活性(98℃ 5min)


本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用,不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療



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