Q:來源
A:煙草蝕紋病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease,來源于煙草蝕紋病毒(TEV)Nla的重組蛋白酶,大腸桿菌重組表達。
Q:TEV protease用途
A:可以用來切除純化后融合蛋白的親和標(biāo)簽
Q:識別位點
A:TEV蛋白酶位點特異性較高,能夠識別EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly),最普通的是ENLYFQG,其切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間。
Q:如何去除
A:該酶帶有His-sumo Tag經(jīng)6*His標(biāo)簽純化,剪切反應(yīng)完畢后可通過Ni-NTA(產(chǎn)品貨號:PAN001)去除。
Q:酶活性單位定義
A:在1*TEV Buffer(50mM Tris-HCL,PH 8.0,0.5mM MEDTA,1mM DTT)中,30℃條件下反應(yīng)1小時,能夠切割3ug的反應(yīng)底物達85%以上所需的酶量定義為一個活性單位。
Q:溶液組分
A:
| TEV protease儲存液 | 10*cleavage Buffer |
| 25mM Tris-HCL,PH8.0 | 500mM Tris-HCL,PH8.0 |
| 150mM NaCL | 5mM EDTA |
| 1mM EDTA | 10mM DTT |
Q:推薦反應(yīng)體系
A:
| 反應(yīng)物組成 | 體積 |
| 融合蛋白 | 50ug |
| TEV protease | 2ul(10U/ul) |
| 10*TEV Buffer | 10ul |
| ddH2O | 至100ul |
Q:活性測試
A:待測融合蛋白100ug,加入TEV protease 2ul,4℃反應(yīng)16小時,取酶切前后樣品SDS-PAGE檢測,>90%融合蛋白被切割。
Q:酶純度
A:>90%
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