Q：貼壁細(xì)胞如何處理

A：貼壁細(xì)胞去除培養(yǎng)基，用PBS洗后，100μL RIPA裂解液（或其他哺乳動物細(xì)胞裂解液）中加入1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

Q：懸浮細(xì)胞如何處理

A：懸浮細(xì)胞離心收集后，在離心管中加入100μL RIPA裂解液（或其他哺乳動物細(xì)胞裂解液）加1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

Q：組織樣品如何處理

A：將30~100mg動物或植物組織研磨充分后，加入100~200μL裂解液，同時(shí)加入1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

Q：大腸桿菌或其他細(xì)菌如何處理

A：細(xì)菌離心收集后，用裂解液或者研磨破碎后，每100μL加入1~5μL全能核酸酶，室溫孵育30min，收集裂解液，離心取上清即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

Q：如何稀釋

A：正常建議稀釋比例（終濃度）為1:1000~1:20000，其中時(shí)間、溫度、稀釋比例為影響反應(yīng)的正面因素。

Q：是否用PBS稀釋

A：是的

Q：能否減少用量

A：如希望減少用量，可酌情提高反應(yīng)溫度或延長時(shí)間

Q：反應(yīng)輔助因子

A：反應(yīng)液中必須補(bǔ)加2-5mM Mg2+

Q：反應(yīng)緩沖液

A：常用生物緩沖液，如TBS、MOPS（pH6-8）等

Q：反應(yīng)抑制因子

A：在含有以下物質(zhì)，Omnipotent  Nuclease的活性會降低50%或以上：
                  >150mM 一價(jià)陽離子，    >100mM 磷酸鹽
                  >100mM 硫酸銨，        >100mM 鹽酸胍
                  >0.1%SDS，             >1%Triton X-100
                  >1%Tween 20

Q：稀釋后每次用多少量，如何試梯度？起始加多少？

A：看不同的實(shí)驗(yàn)要求，添加量可以按照1/100-1/10000之間。真核細(xì)胞需要量比原核細(xì)胞量高，因?yàn)檎婧思?xì)胞中核酸含量高真核細(xì)胞起始添加量可以按照1/1000的比例添加，原核細(xì)胞可以按照1/10000的比例添加；4℃消化DNA添加量比室溫消化DNA添加比例高，因?yàn)槭覝叵翺mnipotent  Nuclease酶活力更高。普通CoIP實(shí)驗(yàn)，蛋白質(zhì)表達(dá)實(shí)驗(yàn)可以適當(dāng)稍加，對DNA殘留要求高的實(shí)驗(yàn)，可以按照1/100的比例添加。

Q：怎樣滅活Omnipotent  Nuclease核酸酶？如何去除？

A：采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制Omnipotent  Nuclease核酸酶活性，極端條件會造成不可逆失活，例如：100mM NaOH，70℃處理30min等。Omnipotent  Nuclease核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產(chǎn)物中分離出去，由于這種核酸內(nèi)切酶極其穩(wěn)定，建議在終產(chǎn)物要求排除核酸酶的應(yīng)用中不要使用Omnipotent  Nuclease核酸酶。

Q：儲存條件

A：保存于-20℃。儲存buffer：20mM Tris-HCl pH 8.0， 50 mM NaCl， 2mM MgCl2, 50% glycerin。

Q：PH

A：建議反應(yīng)體系pH值為6~8

Q：反應(yīng)中需不需要加Mg2+

A：反應(yīng)中Mg2+的終濃度為5~10mM

Q：Omnipotent  Nuclease純度

A：＞99%

Q：Omnipotent  Nuclease作用

A：它可將核酸消化成3-8個(gè)堿基長度的5’-單磷酸寡核苷酸。

Q：Omnipotent  Nuclease特點(diǎn)

A：無蛋白酶、內(nèi)毒素污染，沒有標(biāo)簽，方便下游實(shí)驗(yàn)操作

Q：酶活單位定義

A：將在30min內(nèi)，ΔA260降低1.0（相當(dāng)于完全消化37μg DNA）定義為一個(gè)酶活單位，即1EU。

Q：Omnipotent  Nuclease應(yīng)用

A：1、蛋白提取時(shí)去除核酸污染：在重組蛋白純化或哺乳動物細(xì)胞裂解物下游要求粘度較低的情況下，可以利用Omnipotent  Nuclease核酸酶降低樣品粘度以利操作；
     2、有效減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象；
     3、有利于不可溶性蛋白復(fù)性前，高質(zhì)量包涵體制備；
     4、有效去除帶負(fù)電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響；
     5、在非常廣泛的條件下（6M urea, 0.1 M Guanidine HCl,  0.4% Triton X100, 0.1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF）, 降解所有形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀）DNA和RNA；
     6、去除蛋白質(zhì)產(chǎn)品中的污染，符合FDA關(guān)于核酸污染去除的規(guī)程；
     7、本產(chǎn)品可以與多種細(xì)胞細(xì)菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。

Q：Omnipotent  Nuclease核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？

A：Omnipotent  Nuclease核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物兼容，但含有EDTA的蛋白酶活性抑制劑。當(dāng)EDTA濃度>1mM時(shí)，會抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補(bǔ)加Mg2+

Q：目的蛋白不溶，需要進(jìn)行變性條件純化。Omnipotent  Nuclease核酸酶能在尿素環(huán)境降解核酸嗎？

A：實(shí)際上，Omnipotent  Nuclease核酸酶在具有尿素（6M）的情況下會增加活性。在尿素濃度為6M時(shí)，活性會先增加，再隨著時(shí)間的延長活性降低。尿素濃度為7M時(shí)，Omnipotent  Nuclease核酸酶會在15min后出現(xiàn)變性并失活。但在酶失活前，多數(shù)的核酸已被降解。如果全能核酸酶的原濃度較高時(shí)，會部分補(bǔ)償7M尿素的影響。

Q：產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會受到怎樣的影響？

A：室溫2-3天，對活力影響不大

Q：用全能核酸酶處理表達(dá)蛋白的粗提裂解液，來去除核酸污染，但Taq酶純化過程中避免不了少量細(xì)菌DNA的殘留

A：Taq酶純化時(shí)，除了用Omnipotent  Nuclease消化，后期還需要離子交換樹脂和分子篩或者透析方法去除DNA殘留

Q：反應(yīng)條件

A：Omnipotent  Nuclease 核酸酶的活性需要1-2mM Mg2+.而在單價(jià)陽離子濃度>50%，磷酸濃度>20mM，硫酸銨濃度>25mM等情況下，Omnipotent  Nuclease 的活性可能會降低50%

Q：Omnipotent  Nuclease 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物可以兼容嗎

A：Omnipotent  Nuclease 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是可以兼容，但是對于含有EDTA配方的蛋白酶抑制劑混合物要特別小心，EDTA濃度大于1mM時(shí)會抑制Omnipotent  Nuclease 的活性。

Q：Omnipotent  Nuclease與超聲的作用區(qū)別

A：超聲的確可以破碎細(xì)胞或者組織，但是和Omnipotent  Nuclease有不同之處！

   1.Omnipotent  Nuclease可以將DNA和RNA消化成3-8個(gè)堿基的單磷核苷酸，而超聲只能打碎為大片段，所以處理完樣品很多還是很粘稠，不易吸取上樣；所以在COIP實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入Omnipotent  Nuclease可以降低背景。

   2.如果目的蛋白被核酸包裹，只能使用Omnipotent  Nuclease將核酸消化，才能將蛋白釋放；

   3.超聲就是在冰上操作，也會產(chǎn)熱，易降解熱敏感的蛋白；Omnipotent  Nuclease可以在低溫下消化，不會降解目的蛋白。

Q：哪些實(shí)驗(yàn)可能用得到Omnipotent  Nuclease，在哪一步驟加Omnipotent  Nuclease

A：例如：his蛋白純化，IP實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞裂解時(shí)

Q:樣本黏度高，不易過柱

A:細(xì)胞破碎后由于含有大量DNA和RNA，黏度很高，過柱不容易。解決的方法有兩種：1是用核酸酶。2也可以用高壓勻漿。都可以達(dá)到降低黏度的作用。
差別在于：用核酸酶，DNA和RNA可以絳解成小片段或單核苷酸；高壓勻漿用機(jī)械剪切力將DNA和RNA處理成較大的片斷。
超聲波處理在處理小量表達(dá)的時(shí)候問題不大，但做大量蛋白表達(dá)的時(shí)候有困難。
   核酸酶的另外一個(gè)重要應(yīng)用是：若你的目的蛋白是DNA結(jié)合蛋白，那么純化的時(shí)候最好先用核酸酶處理。  

Q:我的目的蛋白不溶，需要進(jìn)行變性條件純化。Omnipotent  Nuclease核酸酶能在尿素環(huán)境消化核酸嗎？

A:實(shí)際上Omnipotent  Nuclease核酸酶在有尿素（濃度可達(dá)6M）的情況下會增加活性。在尿素濃度為6M時(shí)活性先增加，隨著時(shí)間延長活性又有降低。尿素為7M時(shí)，Omnipotent  Nuclease核酸酶15分鐘后出現(xiàn)變性并失活。但是在酶失活前多數(shù)核酸已經(jīng)降解了。如果Omnipotent  Nuclease核酸酶的原濃度較高時(shí)會部分補(bǔ)償7M尿素的影響。

Q:說明書中建議100ul添加1-5ul 全能核酸酶Omnipotent  Nuclease，而最下面的tips中又建議1:1000-20000稀釋，那么上一句1-5ul是指稀釋前的量還是稀釋后？

A:說明書上的三個(gè)例子都是從上游實(shí)驗(yàn)開始 就使用全能核酸酶 其核酸殘留較多，所以需要用量較多
   如果從下游實(shí)驗(yàn)開始 其中核酸殘留本身已經(jīng)比較少 則需要的全能核酸酶的用量 按照1:1000--1:20000的比例添加即可------這也是一般工業(yè)級的使用方法
   科研實(shí)驗(yàn)的話 建議按照說明書上面的建議 進(jìn)行操作 效果更佳

Q：我的樣本大概是100mL菌液，推薦買多少Omnipotent  Nuclease核酸酶？

A：需要根據(jù)重懸菌體所需裂解液的體積來確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25U/mL；核蛋白則需要100U/mL；病毒表達(dá)蛋白純化需要濃度為12.5U/mL；疫苗產(chǎn)品需要量為0.9~1.1U/mL。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用，不得用于人體 / 動物醫(yī)療、診斷及臨床治療