Q:原理
A:通過和帶負電荷的DNA非共價結(jié)合形成納米聚合物，從而將DNA轉(zhuǎn)染進入真核細胞。
Q:適用細胞
A:對貼壁細胞和懸浮細胞的瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染均有效
Q:轉(zhuǎn)染前24孔板內(nèi)培養(yǎng)細胞，數(shù)量如何確定（細胞培養(yǎng)以24孔板為例，其他培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿參考24孔板進行操作）
A:在轉(zhuǎn)染前一天（20-24小時）把約20-50萬細胞（具體的細胞數(shù)量據(jù)細胞大小和細胞生長速度而定）培養(yǎng)到24孔板內(nèi)，使第二天細胞能達到約50-60%滿。
Q:轉(zhuǎn)染試劑推薦用量
A:預(yù)熱培養(yǎng)基至室溫，取25ul細胞培養(yǎng)液入一無菌離心管中（如OPTI-MEM、DMEM、RPMI1640等），加入1.5ul TransAid 2000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕搖勻。
Q:DNA用量
A:取25ul細胞培養(yǎng)液入另一無菌離心管中，再加入1ug DNA，混勻。
Q:TransAid 2000-DNA混合物
A:把以上轉(zhuǎn)染試劑緩慢、逐滴加入以上DNA溶液中，用移液器上下抽吸或者Vortex混勻，室溫靜置20min。
Q:最佳復(fù)合物形成溫度
A:在混合前，確保轉(zhuǎn)染試劑盒DNA溶液都已混合均勻，推薦20-35℃為最佳復(fù)合物形成溫度。
Q:基因表達
A:對于基因表達，再培養(yǎng)24-40小時候即可檢測轉(zhuǎn)染效果
Q:篩選穩(wěn)定表達細胞株
A:如果用于篩選穩(wěn)定表達細胞株，則在轉(zhuǎn)染后24-40小時即可加入適當(dāng)?shù)暮Y選藥物，例如G418等，進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選。
Q:是否需要更換培養(yǎng)液
A:轉(zhuǎn)染后不更換細胞培養(yǎng)液對大多數(shù)細胞無明顯毒性、不影響轉(zhuǎn)染效率，但是隔夜更換培養(yǎng)液對一些細胞（如干細胞）可以提高轉(zhuǎn)染效率。
Q:轉(zhuǎn)染效果不夠好，有無建議
A:在TransAid 2000的使用中，遇到轉(zhuǎn)染效果不夠好的問題時，如果參照以下的方法，會有意想不到的效果：
1、Q:轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)不好時
A:a、提高細胞的豐度（80%-90%）；
b、按比例減少DNA和TransAid 2000的用量（以24孔板為例，調(diào)整比例為0.5ug DNA：1ul TransAid 2000）；
2、Q:某些難轉(zhuǎn)染的細胞
A:改變孵育方法，包括：
a、改變孵育的程序：質(zhì)粒和TransAid 2000共同加到一個管一起孵育20分鐘（以24孔板為例，在100ul培養(yǎng)基里，先加入DNA，混勻后，直接加入TransAid 2000后充分混勻）；
b、改變孵育溫度：多數(shù)情況下，室溫孵育就會有好結(jié)果，但是對于某些難轉(zhuǎn)染的細胞，在37℃孵育，轉(zhuǎn)染效率會提高30-50%。
c、延長轉(zhuǎn)染時間：一般24小時內(nèi)，轉(zhuǎn)染就會完成，但是有時蛋白表達不明顯（例如示蹤的GFP的表達），這時可以換新鮮的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24小時，轉(zhuǎn)染效果從蛋白表達上看，會非常明顯。以Hela細胞為例，采用1ug DNA：2.5ul TransAid 2000，室溫孵育20min，24小時換液，48小時候觀察，75%以上的細胞為轉(zhuǎn)染陽性。
Q:含血清或無血清的培養(yǎng)基是否可直接加入進行轉(zhuǎn)染
A:須無血清培養(yǎng)基
Q:質(zhì)粒DNA, DNA, siRNA是否均可轉(zhuǎn)染？
A:均可轉(zhuǎn)染
Q:轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化
A:對于24孔板中一個孔的細胞，TransAid 2000的用量可以在1-5ul內(nèi)進行適當(dāng)調(diào)節(jié)，DNA用量可以在0.5-2ug的范圍內(nèi)進行適當(dāng)調(diào)節(jié)。最佳的轉(zhuǎn)染條件，因具體的細胞和培養(yǎng)條件而定，可以在上述推薦范圍內(nèi)自行優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。
Q:如若不是24孔板，試劑用量怎么定？
A:對于其他培養(yǎng)板或培養(yǎng)器皿，各種試劑的用量可以按照細胞培養(yǎng)面積按比例進行換算。詳見下表
|
Culture Vessel
|
Surface
area(cm2)
|
Typical
volume of medium(ml)
|
Recomm
ended quantity of DNA*(ug)
|
Recomm
ended volume of TransAid 2000*(ul)
|
Dilut
in media respectively(ul)
|
Complete
medium in well
|
|
96-well
|
0.3
|
0.1
|
0.2
|
0.25
|
10/10
|
80ul
|
|
24-well
|
2
|
0.5
|
1
|
1.5
|
25/25
|
0.45ml
|
|
12-well
|
4
|
1
|
2
|
3
|
50/50
|
0.9ml
|
|
6-well
|
10
|
2
|
4
|
8
|
125/125
|
1.75ml
|
|
35-mm
|
10
|
2
|
4
|
8
|
125/125
|
1.75ml
|
|
60-mm
|
30
|
5
|
10
|
25
|
250/250
|
4.5ml
|
|
10-cm
|
55
|
10
|
20
|
50
|
500/500
|
9ml
|
|
T25
|
25
|
5
|
10
|
25
|
250/250
|
4.5ml
|
|
T75
|
75
|
20
|
30
|
75
|
750/750
|
18ml
|
上表中給出的DNA和TransAid 2000的參數(shù)均是由pEGFP-N1轉(zhuǎn)染293T、CH0、NIH-3T3、HeLa、HepG2以及COS-7得出的數(shù)值，若轉(zhuǎn)染其他細胞系可對DNA和TransAid 2000的用量、細胞密度及轉(zhuǎn)染時間等進行優(yōu)化。對于難以轉(zhuǎn)染的細胞，同時建議用TransAid2000 Plus代替TransAid 2000.
Q:TransAid 2000轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)體還是非脂質(zhì)體
A:非脂質(zhì)體
本產(chǎn)品僅供科研實驗使用，不用于臨床診斷、治療及其他非科研用途。
