Q:貼壁細(xì)胞樣品準(zhǔn)備

A:吸棄細(xì)胞培養(yǎng)液，胰酶消化吹打細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液，1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。

Q:懸浮細(xì)胞樣品準(zhǔn)備

A:1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞

Q:組織細(xì)胞樣品準(zhǔn)備

A:將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰酶消化0.5-1個(gè)小時(shí)。經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細(xì)胞懸液。1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再一次1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。

Q:細(xì)胞如何收集

A:我們推薦用6孔板或者6cm dish，收集細(xì)胞時(shí)全部收集，以防止實(shí)驗(yàn)誤差

Q:細(xì)胞如何固定

A:細(xì)胞沉淀用1ml預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2個(gè)小時(shí)以上或者過夜。接下來1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞后，用1ml預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000g離心5分鐘沉淀細(xì)胞。

Q:碘化丙啶染色液配置

A:1ml染色緩沖液中加入25ul碘化丙啶儲(chǔ)液和20ul RNase A，混勻待用。

Q:每個(gè)細(xì)胞樣品加入多少染色液

A:每個(gè)細(xì)胞樣品加入0.5ml配置好的碘化丙啶染色液，輕輕混勻重懸細(xì)胞。

Q:孵育多長時(shí)間

A:37℃，避光溫浴30分鐘

Q:多長時(shí)間內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測

A:上流式細(xì)胞儀檢測（5小時(shí)內(nèi)完成為佳）。

Q:檢測參數(shù)

A:激發(fā)波長為488nm，檢測紅色熒光。

Q:配置好的碘化丙啶染色液保存溫度，最長可以保存多久

A:配置好的PI染色液4℃保存1個(gè)星期。-20℃保存1個(gè)月。避免反復(fù)凍融

Q:如何保存

A:在-20℃，避光條件下，保存1年以上。0-5℃，避光條件下，可以保存2個(gè)月。

Q:自備試劑

A:PBS；70%乙醇

Q:是否需要加細(xì)胞打孔的東西

A:說明書中標(biāo)明需客戶自備的70%乙醇，就有細(xì)胞打孔的作用。70%的乙醇具有固定和打孔的作用 無需再另外準(zhǔn)備其他打孔的東西

Q:是否避光

A:碘化丙啶存在淬滅現(xiàn)象，保存和使用過程中注意避光

Q:通常進(jìn)行細(xì)胞周期試驗(yàn)的時(shí)候藥物都作用多久

A:細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)時(shí)，PI孵育細(xì)胞一段時(shí)間后，盡快流式檢測。時(shí)間過長，會(huì)造成染色過度或者細(xì)胞破碎等情況，造成實(shí)驗(yàn)誤差。

Q:在流式細(xì)胞儀檢測成纖維細(xì)胞S期細(xì)胞比例的情況，是否可用周期試劑盒

A:可用，只要是能處理成單細(xì)胞懸液，都可以用周期試劑盒

Q:試劑盒本身有無紅色？實(shí)驗(yàn)過程中染不上色原因？如何解決？

A:試劑盒中應(yīng)該有紅色的PI，也許是試劑盒中的PI已經(jīng)失效，建議避光保存

Q:希望G0期和G1期能夠分開看結(jié)果，檢測中比重，如何做？

A:所有的PI染色周期試劑盒都不能區(qū)分G0和G1期。分不開  G0和G1期，染色體都是單倍，PI染色一樣，無法區(qū)別。

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)使用，不用于臨床診斷或治療。