Q:這種直接PCR試劑盒，擴(kuò)增產(chǎn)物可以做哪些實(shí)驗(yàn)

A:PCR的產(chǎn)物可以通過瓊脂糖凝膠電泳和EB染色進(jìn)行分析，進(jìn)行下游的常規(guī)操作，例如限制性酶切、DNA測序、dHPLC分析等

Q:適用樣品

A:酵母、真菌和霉菌等

Q:模板制備需要多久

A:10min內(nèi)完成模板制備，無需DNA抽提，樣品處理快鍵

Q:可以應(yīng)用于哪些領(lǐng)域

A:1、人類、其他哺乳動物和鳥類基因分析；2、可用于常規(guī)檢測：限制性酶切、瓊脂糖凝膠電泳/EB染色、熒光毛細(xì)管電泳、DNA測序或dHPLC分析

Q:是否需要去除其他RNA、蛋白等

A:提取的DNA可以馬上用于PCR反應(yīng)，不需要去除其他蛋白、RNA或者次生代謝產(chǎn)物，滿足快速檢測的需要，特別適合大規(guī)模基因分型、高通量篩選等科研場景

Q:樣品預(yù)處理

A:直接挑取單克隆進(jìn)行PCR；或采用簡單預(yù)處理步驟：1、用槍頭或牙簽取單克隆，投入40ul預(yù)處理液中，95℃水浴10min，10000rpm離心1min，取1-4ul上清進(jìn)行PCR；2、取酵母培養(yǎng)液，離心，吸除培養(yǎng)基，加入20ul預(yù)處理液，煮沸2-3min，取1-4ul樣品進(jìn)行PCR，剩樣保存在-20℃

Q:反應(yīng)體系

A:以40ul體系示例（20-50ul/reaction），在微量離心管中加入以下各種成分

酵母裂解液	1-2.5ul
聚合酶	1-2ul
5*PCR Buffer	8ul
dNTP（10mM）	0.8ul
Primers	1-2ul（0.25-1uM終濃度）
ddH2O	UP to 40ul

Q:PCR反應(yīng)參數(shù)設(shè)置

A:依據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物而定，以2kb的擴(kuò)增產(chǎn)物為例：94℃ 4 min，35 cycles（94℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min），72℃ 5 min，4℃soak。

Q:我的片段大?。?kb

A:擴(kuò)增1kb以下片段，30 sec延伸即可；也可采用兩步擴(kuò)增法（設(shè)計引物長度22-25bp，68℃退火延伸）

Q:轉(zhuǎn)化子鑒定

A:鑒定轉(zhuǎn)化子可以直接挑取單克隆作為PCR模板，但細(xì)胞量不能太多，最好控制在10000個細(xì)

Q:裂解液使用量是否有要求

A:聚合酶可以耐受最高10%（V/V）的裂解液，過量裂解液會對PCR反應(yīng)產(chǎn)生抑制并對下游產(chǎn)物分析產(chǎn)生不利影響，大多數(shù)情況加入2-5%（V/V）酵母裂解液可以完成PCR反應(yīng)

Q:如何確認(rèn)加入模板的最佳范圍

A:初次實(shí)驗(yàn)，建議加入1%、2.5%和5%（V/V）酵母裂解液

Q:反應(yīng)為陰性，跟dNTP有關(guān)嗎

A:dNTP容易失效，反應(yīng)為陰性時，建議增加dNTP用量，或者更換新鮮制備的dNTP

Q:細(xì)菌或霉菌樣品如何操作

A:酵母PCR試劑盒可以用于細(xì)菌、霉菌或者其他真菌的免抽提PCR，方法一樣

Q:每次反應(yīng)多少細(xì)胞量

A:本酶靈敏度很高，每次反應(yīng)500-20000細(xì)胞PCR反應(yīng)最佳

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)使用，不用于臨床診斷、治療或人體基因檢測。