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治療性抗體 · 新型疫苗 · 試劑和原料

7Sea-Soil Direct PCR試劑盒

Q:模板制備需要多久

A:無(wú)需DNA提取，樣品處理快捷，可在5-20min內(nèi)完成模板制備



Q:這種直接PCR試劑盒，擴(kuò)增產(chǎn)物可以做哪些實(shí)驗(yàn)

A:PCR的產(chǎn)物可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和EB染色進(jìn)行分析，進(jìn)行下游的常規(guī)操作，例如限制性酶切、DNA測(cè)序、dHPLC分析等




Q:樣品預(yù)處理

A:把土壤樣品加入5-10倍左右體積的裂解液中，煮沸2-5min（或者75℃加熱20min，每隔10min劇烈震蕩一次，然后高速離心20min（12000g），小心取上清并移入樣品管中，從制備好的上清中取1-2.5ul（2-5%總體反應(yīng)體積）含有DNA的裂解液加入PCR反應(yīng)體系作為模板，剩余樣品可以在-20℃儲(chǔ)存。


Q:反應(yīng)體系

A:以40ul體系示例（20-50ul/reaction），在微量離心管中加入以下各種成分


土壤抽提液 1-2.5ul
聚合酶 1-2ul
5*PCR Buffer 8ul
dNTP（10mM） 0.8ul
Primers 1-2ul（0.25-1uM終濃度）
ddH2O UP to 40ul


Q:PCR反應(yīng)參數(shù)設(shè)置

A:依據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物而定，以2kb的擴(kuò)增產(chǎn)物為例：94℃ 4 min，30 cycles（94℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min），72℃ 5 min，4℃保溫。


Q:我的片段大?。?kb

A:擴(kuò)擴(kuò)增 1kb 以下片段，5–10 秒延伸即可；也可采用兩步擴(kuò)增法（設(shè)計(jì)引物長(zhǎng)度22-25bp，68℃退火延伸）


本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用，不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療


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