Q:作用
A:UNG酶可選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或單鏈DNA中的尿嘧啶糖苷鍵,對(duì)RNA無活性,主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。
Q:酶活性單位定義
A:在20mM Tris-HCL(PH8.0),1mM DTT,1mM EDTA反應(yīng)液中,37℃–50℃條件下反應(yīng)1小時(shí),能夠降解1nmol含尿嘧啶的DNA所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。
Q:活性測(cè)試
A:在含dUTP不含dUTP的PCR產(chǎn)物中,加入或不加UNG酶,50°反應(yīng)2分鐘,94℃ 2 分鐘滅活UNG酶,電泳檢測(cè)條帶。
結(jié)果顯示,在含dUTP的PCR產(chǎn)物中加UNG酶,50°反應(yīng)2分鐘后,DNA被完全降解;在不含dUTP的PCR產(chǎn)物中加UNG酶,電泳譜帶不發(fā)生變化。
Q:酶儲(chǔ)存緩沖液配置
A:
|
20mM |
Tris-HCL(PH7.5) |
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50mM |
NaCL |
|
1mM |
DTT |
|
1mM |
EDTA |
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50%(v/v) |
Glycerol |
Q:推薦實(shí)驗(yàn)
A:本酶可作用于普通PCR反應(yīng)液和RT-PCR反應(yīng)液
Q:PCR反應(yīng)體系配置實(shí)例
A:
|
反應(yīng)液組分 |
加量 |
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5xPCR Buffer |
5ul |
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dU plus dNTP Mix |
1ul |
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Primer1(10uM) |
0.5ul |
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Primer2(10uM) |
0.5ul |
|
Taq(5U/ul) |
0.2ul |
|
UNG(1U/ul) |
0.2ul |
|
模板 |
1ul |
|
蒸餾水 |
up to 25ul |
Q:反應(yīng)條件
A:50°反應(yīng)2分鐘,94°處理2分鐘,隨后做PCR擴(kuò)增
Q:反應(yīng)溫度、時(shí)間;失活溫度、時(shí)間;是不是95°變性?55°是否可以失活?反應(yīng)多久?
A:50°反應(yīng)2分鐘,94度2分鐘失活。55度也可以失活,反應(yīng)5min
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