Q:懸浮細(xì)胞樣品制備
A:對于懸浮細(xì)胞，在進(jìn)行完細(xì)胞凋亡刺激后，1000g 離心5 分鐘
Q:貼壁細(xì)胞樣品制備
A:對于貼壁細(xì)胞，把細(xì)胞培養(yǎng)液吸出至一合適離心管內(nèi)（內(nèi)含已經(jīng)懸浮的發(fā)生凋亡或壞死的細(xì)胞），PBS洗滌貼壁細(xì)胞一次，加入適量胰酶消化細(xì)胞。室溫孵育至輕輕吹打可以使細(xì)胞吹打下來時，吸除胰酶，避免胰酶消化不夠或消化過度。加入收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，輕輕吹打均勻，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500g 離心5 分鐘
Q:中晚期凋亡細(xì)胞是否可以丟棄
A:中晚期凋亡細(xì)胞因失去貼壁能力而懸浮于上清中，此部分細(xì)胞對于結(jié)果是否顯著具有重大影響，不可任意丟棄，需離心收集后一起檢測才能全面反映出細(xì)胞凋亡的整體情況
Q:Annexin V 凋亡檢測試劑盒適用樣本
A:哺乳動物細(xì)胞
Q:昆蟲細(xì)胞是否可以用這種凋亡檢測方法
A：可以
Q：胰酶消化時的細(xì)胞處理
A：胰酶消化時細(xì)胞處理需要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞
Q：如何重懸細(xì)胞
A：棄上清，用1ml PBS 輕輕重懸細(xì)胞
Q：細(xì)胞數(shù)量有無要求
A：細(xì)胞數(shù)量不少于105
Q：細(xì)胞計數(shù)后直接收集細(xì)胞嗎
A：500g 離心5 分鐘，收集細(xì)胞
Q：1000g離心5分鐘，是否可以室溫
A：4℃
Q：巨噬細(xì)胞的凋亡實驗是否可用？動物細(xì)胞（如兔腫瘤細(xì)胞）/植物細(xì)胞及其他細(xì)胞是否都可用？
A：巨噬細(xì)胞、動物細(xì)胞都可以用annexinV-FITC檢測凋亡。植物細(xì)胞。真菌細(xì)胞等具有細(xì)胞壁的細(xì)胞不能用annexinV-FITC檢測。
Q：FITC染不上色可能是什么原因?qū)е?？如何解決
A：annexinV-FITC染不上色的主要原因沒有完全漂洗干凈，細(xì)胞培養(yǎng)基中的螯合物質(zhì)螯合了Ca2+,影響了annexinV和PS的結(jié)合?；蛘卟煌募?xì)胞系，摸索一下實驗條件，annexinV-FITC加5-10uL每樣本。
Q：將組織消化成細(xì)胞，如何判定消化好了？
A：組織消化成單細(xì)胞判定標(biāo)準(zhǔn)是顯微鏡下成單細(xì)胞狀態(tài)或者大部分為單細(xì)胞狀態(tài)。流式細(xì)胞儀檢測時，設(shè)對照組去掉多細(xì)胞的團(tuán)塊。
Q：凋亡前期的細(xì)胞群與正常細(xì)胞群分離不是很清晰，如何解決？
A：凋亡前期和正常細(xì)胞分離不清晰，可能與樣本有關(guān)，可重復(fù)實驗看看結(jié)果。同時設(shè)置合適的門限，數(shù)據(jù)也是可信的。
Q：胰酶中是否可以含EDTA？
A：不要含有，如果有的話，用我們的Binding buffer洗至少一遍。
Q：為何要用PBS洗滌細(xì)胞
A：PBS 洗滌細(xì)胞，洗掉殘留的胰酶
Q：殘留的胰酶是否一定要洗凈
A：殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，最終導(dǎo)致染色失敗。
Q：buffer的使用量
A：加入400μl 1×Binding Buffer 輕輕重懸細(xì)胞
Q：如消化液中含有EDTA，是否需要處理
A：如果消化液中含有EDTA則需加入400ul 1*binding buffer洗滌一次。
Q：每次加入多少Annexin V FITC
A：加入5μl Annexin V-FITC，輕輕混勻，室溫避光孵育15 分鐘。
Q：每次加入多少PI
A：加入10μl PI 染色液，輕輕混勻，冰浴避光放置5 分鐘。
Q：Annexin V-FITC和PI是否可以同時孵育？
A：可以
Q：孵育多久上流式細(xì)胞儀檢測
A：在30 分鐘內(nèi)進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測
Q：會顯什么顏色
A：Annexin V-FITC 為綠色熒光，PI 為紅色熒光。
Q：如何用熒光顯微鏡觀察
A：如果用熒光顯微鏡下檢測，則1000g 離心5 分鐘，收集細(xì)胞，用50-100μl 1×Binding Buffer輕輕重懸細(xì)胞，涂片后，熒光顯微鏡下觀察。
Q：如果用熒光顯微鏡分析，離心和重懸是在第幾步之后進(jìn)行的？
A：建議優(yōu)先使用流式細(xì)胞儀分析；若用熒光顯微鏡，需在染色完成后立即檢測
Q：補償怎么做？
A：補償信息內(nèi)容較多，如需文本，詳詢技術(shù)，我們會通過郵件發(fā)送給您。
Q：如何用流式細(xì)胞儀分析
A：流式細(xì)胞儀激發(fā)光采用激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長530 nm 檢測FITC 和>575 nm 檢測PI。Annexin V-FITC 的綠色熒光通過FITC 通道（FL1）檢測；PI 紅色熒光通過PI 通道（FL3/FL2 建議使用FL3）檢測。
Q：用流式細(xì)胞儀分析后最后的結(jié)果是什么樣
A：細(xì)胞應(yīng)可分成三個亞群：正?；罴?xì)胞僅有很低的熒光強(qiáng)度，凋亡細(xì)胞有較強(qiáng)的綠色熒光，壞死細(xì)胞有綠色和紅色熒光雙重染色。
Q：保存
A：4℃保存，Annexin V-FITC、PI 染色液需避光保存，半年有效。若長期保存，可以把PI 染色液適當(dāng)分裝后-20℃保存，Annexin V-FITC 結(jié)合液可以直接-20℃保存。
Q：所需試劑及儀器
A：1. PBS
2. 蒸餾水或去離子水
3. 水平離心機(jī)
4. 流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡
5. 移液器
Q：Annexin V FITC/PI雙染法凋亡流式細(xì)胞凋亡檢測試劑盒可以檢測哪些種類細(xì)胞
A：該試劑盒只能檢測活細(xì)胞，而不能用于切片、擦刮、固定或浸潤細(xì)胞樣品的檢測
Q：染色后如果時間比較長了會不會影響結(jié)果
A：細(xì)胞凋亡是一種持續(xù)變化的動態(tài)過程，選擇合適的誘導(dǎo)時間對觀察凋亡比較重要。染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
Q：如果有細(xì)菌污染，有無影響
A：如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
Q：有殘留胰酶
A：PBS 洗滌細(xì)胞，洗掉殘留的胰酶，否則殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，最終導(dǎo)致染色失敗。
Q：觀察時間在多久之內(nèi)合適
A：熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
Q：含有血小板的血液樣品是否需要處理
A：檢測血液樣品時，如果含有血小板，請使用含有EDTA 的緩沖劑并200×g 離心洗去血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V 結(jié)合，從而干擾實驗結(jié)果。
Q：血液樣品，用了EDTA的緩沖劑，有什么要注意的嗎？
A：離心去血小板
Q：試劑盒使用過程中對光有無要求
A：Annexin V-FITC 和PI 是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光
Q：種屬是豬，如何做同型對照
A：我們目前的產(chǎn)品不需要同型對照
Q：加了PI之后，不是在冰浴的情況下放置的，有無影響？感覺實驗結(jié)果不是很漂亮，是和這個有關(guān)嗎？
A：建議冰浴。如果不冰浴會造成假陽性。
Q：是否可做細(xì)胞周期檢測，是不是關(guān)掉一個通道就可以用另一通道測細(xì)胞周期
A：建議不要做細(xì)胞周期實驗，Annexin V是會影響PI的度數(shù)的，即便關(guān)閉了一個通道，影響依然存在，如果說只用我們AV FITC/PI試劑盒中的PI也是不行的，PI的濃度不夠，沒有專門的細(xì)胞周期試劑盒中的PI濃度高，做出來結(jié)果會不好
Q：是否可用于細(xì)胞爬片
A：可以做，一般很少這樣做，都是用流式的方法
Q：定量檢測凋亡率比較成熟的是哪些實驗方法？要能區(qū)分正常細(xì)胞，凋亡細(xì)胞和死亡細(xì)胞的。
A：annxinV-FITC/PI雙染可以區(qū)分正常細(xì)胞，凋亡早期細(xì)胞，凋亡晚期細(xì)胞。
Q：細(xì)胞凋亡實驗之前用的是EGFP PI雙染的，現(xiàn)在用的FITC PI雙染檢測細(xì)胞凋亡的試劑盒。流式細(xì)胞儀檢測的時候，兩個對比圖的十字門刻度位置是要一樣的嗎？兩個圖刻度不一樣的。這樣對比科學(xué)的嗎？
A：不同熒光素之間沒有可比性，而且其電壓、補償不一定都一樣，沒有比較意義；同一次實驗中，只要樣品和同型對照或陰性對照的畫門一致就行
Q:是否需要設(shè)置單陽管
A:推薦設(shè)置
Q:如何設(shè)置單陽管
A:AnnxinV-FITC/PI雙染法測細(xì)胞凋亡。推薦設(shè)置單管陽性對照用于熒光補償，即樣本經(jīng)過同樣的處理方式，但是單獨用AnnexinV-FITC或PI單染細(xì)胞，然后上流式細(xì)胞儀，根據(jù)系統(tǒng)給出的數(shù)值設(shè)置熒光補償參數(shù)。
Q:需要設(shè)置陰性對照嗎
A:不需要
Q:細(xì)胞很快下沉
A:細(xì)胞下沉與試劑本身無關(guān)，建議確認(rèn)：1、細(xì)胞種類；2、是否消化成單細(xì)胞
本產(chǎn)品僅供科研實驗使用，不用于臨床診斷、治療及其他非科研用途。
