Q:Prescission Protease可識(shí)別哪些序列
A:PP酶特異識(shí)別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln/Gly-Pro中的Gln和Gly殘基而進(jìn)行切割,讀物的識(shí)別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)還依賴于融合蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。
Q:切割哪種標(biāo)簽
A:PP酶可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達(dá)出的帶有酶底物識(shí)別多肽序列融合蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行分離。
Q:酶活性單位定義
A:在5℃條件下反應(yīng)16小時(shí),能夠切割100ug的GST標(biāo)簽的融合蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。
Q:Prescission Protease儲(chǔ)存液成分
A:25mM Tris-HCl,PH 8.0
150mM NaCl
1mM EDTA
5mM DTT
50%(v/v)Glycerin
Q:10*Cleavage Buffer成分
A:500mM Tris-HCl,PH 7.0
1.5M NaCl
10mM EDTA
10mM DTT
Q:推薦反應(yīng)體系
A:
| 反應(yīng)物組成 | 體積 |
| GST融合蛋白 | 100ug |
| Prescission Protease | 2ul(1U/ul) |
| 10*Cleavage Buffer | 10ul |
| ddH2O | 至100ul |
Q:參考反應(yīng)時(shí)間
A:4℃反應(yīng)15-16小時(shí)
Q:蛋白純度
A:>95%,as determined by SDS-PAGE
Q:儲(chǔ)存條件
A:長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-80℃,可保存2年;或小量分裝后保存于-20℃,可保存6個(gè)月,避免反復(fù)凍融。10*Cleavage Buffer置于-20℃保存。
Q:PP酶與腸激酶/凝血酶的區(qū)別
A:識(shí)別位點(diǎn)不一樣,反應(yīng)buffer不一樣
Q:酶活、切割效率如何
A:酶切效率表現(xiàn)良好
Q:實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)融合蛋白只切了一小部分,大部分未被切除,原因?解決方法
A:適當(dāng)提高切割反應(yīng)的溫度,時(shí)間,適當(dāng)增加酶量。
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用,不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療
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