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Prescission protease

Q:Prescission Protease可識(shí)別哪些序列

A:PP酶特異識(shí)別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln/Gly-Pro中的Gln和Gly殘基而進(jìn)行切割,讀物的識(shí)別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)還依賴于融合蛋白的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。



Q:切割哪種標(biāo)簽

A:PP酶可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達(dá)出的帶有酶底物識(shí)別多肽序列融合蛋白的GST標(biāo)簽進(jìn)行分離。




Q:酶活性單位定義

A:在5℃條件下反應(yīng)16小時(shí),能夠切割100ug的GST標(biāo)簽的融合蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。




Q:Prescission Protease儲(chǔ)存液成分

A:25mM Tris-HCl,PH 8.0
   150mM NaCl
   1mM EDTA
   5mM DTT
   50%(v/v)Glycerin


Q:10*Cleavage Buffer成分

A:500mM Tris-HCl,PH 7.0
   1.5M NaCl
   10mM EDTA
   10mM DTT


Q:推薦反應(yīng)體系

A:

反應(yīng)物組成 體積
GST融合蛋白 100ug
Prescission Protease 2ul(1U/ul)
10*Cleavage Buffer 10ul
ddH2O 至100ul



Q:參考反應(yīng)時(shí)間

A:4℃反應(yīng)15-16小時(shí)


Q:蛋白純度

A:>95%,as determined by SDS-PAGE


Q:儲(chǔ)存條件

A:長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-80℃,可保存2年;或小量分裝后保存于-20℃,可保存6個(gè)月,避免反復(fù)凍融。10*Cleavage Buffer置于-20℃保存。




Q:PP酶與腸激酶/凝血酶的區(qū)別

A:識(shí)別位點(diǎn)不一樣,反應(yīng)buffer不一樣


Q:酶活、切割效率如何

A:酶切效率表現(xiàn)良好


Q:實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)融合蛋白只切了一小部分,大部分未被切除,原因?解決方法

A:適當(dāng)提高切割反應(yīng)的溫度,時(shí)間,適當(dāng)增加酶量。


本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用,不得用于人體 / 動(dòng)物醫(yī)療、診斷及臨床治療


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